基于模板切换的mrna5'末端全长扩增方法

本文介绍一种称为capfinder的技术，可用于克隆基因mrna序列的5'末端非翻译区全长。该技术是利用某些反转录酶在反转录达到mrna的5'末端帽结构时表现出很高的加尾活性(主要添加dc)这一特点，在反转录体系中加入一种带ggg的寡核苷酸序列，当反转录反应到达mrna模板的5'末端帽结构时，切换到以该寡核酸为模板继续进行反转录反应，即可合成完整的cdna一链，且在其3'末端还带有一段额外的寡核苷酸序列。用ggg寡核苷酸序列为上游引物和基因特异性的下游引物进行pcr即可扩增得到mrna5'末端非翻译区的全长。利用该技术克隆了棉铃虫幼虫中肠bt毒素受体e-钙粘素基因的5'末端非翻译区序列。