克雷伯氏菌甘油脱氢酶dhad的克隆表达、纯化及酶学性质研究

以克雷伯氏菌基因组dna为模板，扩增得到编码甘油脱氢酶（gdh）的基因dhad，将其克隆到大肠杆菌表达载体pet-28a(+)上，在e.colibl21（de3）中诱导表达，利用表达载体pet-28a(+)上的6·his-tag标记选用ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的甘油脱氢酶(gdh)，纯化后比酶活达到156u/mg，纯化倍数达4.6倍，回收率为67.4%。并初步研究了该酶的酶学性质，酶反应的最适ph为11.0，在ph7.0～12.0范围内稳定；酶反应的最适温度为30℃，稳定范围为25～45℃;酶动力学参数以甘油为底物的km为0.54mmol/l,vmax为0.49μmol/(ml·min)。