牛呼吸道合胞体病毒g蛋白的截短表达与鉴定

经生物学软件dnastar分析，将牛呼吸道合胞体病毒g基因截短成2个片段g1和g2。然后用人工合成的牛呼吸道合胞体病毒g基因为模板，用pcr分别扩增g1和g2基因片段，其大小分别为570bp和308bp。将目的片段定向克隆到pet30a表达载体中，酶切及测序鉴定均正确后，转化bl21表达菌，经iptg诱导后g1和g2基因片段都获得了表达，且都为可溶性表达。用ni柱亲和层析法在非变性条件下纯化重组蛋白，经免疫印迹试验鉴定证明纯化的重组蛋白g1具有良好的抗原性和特异性，而重组蛋白g2无反应性。应用纯化的重组蛋白g1进行的间接elisa与免疫印迹试验在国内牛血清中检测到了brsv血清抗体。本研究所表达的重组蛋白g1为基于牛呼吸道合胞体病毒g蛋白的血清学诊断方法的建立与牛呼吸道合胞体病毒g蛋白生物学功能的研究奠定了基础。