前肽缺失体vwf改善fviii基因断裂转移细胞的重链和活性分泌

通过转vonwillebrand因子(vwf)的前肽缺失突变体(vwf-δpro)基因,探讨了vwf-δpro对双载体转凝血viii因子(fviii)基因的影响。将vwf-δpro基因和b-区缺失型fviii(bdd-fviii)的重、轻链基因共转染hek293细胞48h后,elisa检测重链的分泌量为(142±29)ng/ml,明显高于未转vwf-δpro基因细胞(87±15)ng/ml;未转vwf-δpro基因时单独转重链基因的重链分泌水平很低,vwf-δpro存在时重链分泌量明显提高,但不如共转基因时的重链分泌,提示轻链可反式促进重链分泌;单独转轻链或与重链共转基因时轻链分泌水平均较高,且不受vwf-δpro影响;coatest法检测分泌的凝血活性显示,转vwf-δpro基因可使细胞分泌的凝血活性明显高于未转vwf-δpro基因细胞(0.80±0.15iu/mlvs0.41±0.08iu/ml)。另外,转vwf-δpro基因条件下,合并培养转重链和转轻链基因细胞的培养上清中,也检测到fviii凝血活性(0.23±0.09iu/ml),提示vwf-δpro有助于分泌的重、轻链形成功能性异源二聚体。表明转vwf-δpro基因可促进双链转fviii基因,为进一步动物体内实验奠定了基础。