人源性抗bfgf单链抗体表达载体的构建与酵母表达

为了提高人源性抗bfgf抗体的表达量,从噬菌体抗体库筛选出的人源性抗bfgf抗体基因中亚克隆单链抗体(singlechainfragmentvariable,scfv)基因,并将其构建到酵母表达载体ppiczαa中。表达载体质粒经线性化后,电转化法转化至毕赤酵母gs115中,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化,并检测其生物学活性。酶切鉴定结果显示人源性的酵母表达载体构建成功。sds-page和westernblot结果显示,抗bfgf单链抗体获得了高效表达,表达量可达124mg/l,目的蛋白大小为36kda左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。elisa结果显示纯化的目的蛋白可与bfgf特异性结合。cck8检测结果显示,纯化的抗bfgf单链抗体可剂量依赖性地抑制人肺腺癌细胞株a549的增殖。研究结果表明在毕赤酵母中可获得人源性抗bfgf单链抗体高效表达,表达产物具有很好的生物学活性。