苯甘氨酸氨基转移酶基因hpgt的原核优化表达与酶动力学特性研究

苯甘氨酸氨基转移酶(4-hydroxyphenylglycineaminotransferase)是假单胞菌所产生的一种能够合成d-苯甘氨酸的重要转氨酶。利用密码子优化技术,合成苯甘氨酸转移酶基因。构建原核重组质粒pcdf-hpgt,转入感受态细胞e.colibl21(de3),优化表达his-hpgt蛋白。利用ni-nta柱纯化技术获得高纯度的his-hpgt融合蛋白。分别测定融合蛋白在正反向反应中的酶活力单位及最佳的反应温度、ph值及其他动力学参数,并对该酶特性作相关的机理分析。测定结果表明,正向反应和反向反应的酶比活力分别为749mu/mg、2257mu/mg,此酶分解苯甘氨酸的能力要强于合成苯甘氨酸;正向反应的最适温度与ph分别是35℃和8.0;由米氏方程得出该酶对苯甘氨酸的亲和力远大于谷氨酸;较低浓度的苯乙醛酸即可抑制反应的进行。