胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响

目的：通过shrna干扰高效敲低猪肝脏细胞中irs1和irs2基因的表达，进而验证其对于糖脂代谢相关基因表达的影响，为构建2型糖尿病模型猪奠定基础。方法：首先通过重叠pcr方法克隆了猪irs1基因全部的mrna序列（4814bp）以及通过3'race方法克隆了猪irs2基因的部分3'非编码区（3-untranslatedregion，3'utr）。然后，通过real-timepcr筛选获得了能显著敲低这两个基因的shrna片段，并在同时敲低irs1和irs2的猪肝脏细胞中，检测糖脂代谢相关基因的表达。结果：猪肝脏细胞中irs1和irs2的表达被显著敲低，分别下降了78%和64%。另外，糖异生作用酶磷酸烯醇丙酮酸激酶（phosphoenolpyruvatecarboxykinase，pepck）和果糖-1，6-二磷酸酶（fructose-1，6-bisphosphatase，f-1，6-bp）基因表达显著上升，并导致催化肝脏中糖酵解反应的葡糖激酶（glucokinase，gck）基因表达的显著下降。同时，胆固醇调节元件结合蛋白（sterolregulatoryelement-bindingproteins，srebp-1）基因的表达也显著上升以及胆固醇调节基因abcg8，cyp7a1表达明显上调。结论：猪肝脏细胞中irs1和irs2基因的敲低可激活糖异生作用，并抑制糖酵解反应，从而导致糖代谢的异常，同时也能引起脂类代谢的异常。