ibv核蛋白的表达纯化及在监测中应用

鸡传染性支气管炎病毒（infectiousbronchitisvirus，ibv）是禽类一种变异性很强的冠状病毒，为获得高度纯化的ibv核蛋白，建立监测ibv抗体的方法，通过rt-pcr从ibv中扩增ibv-n基因，定向连接到表达载体pgex-kg中，转化e.colibl21（de3）菌株，诱导获得表达产物，sds-page分析产物大小、westernblot分析其免疫学活性，通过亲和层析法获得高度纯化的表达蛋白，建立一种检测ibv抗体的方法，并应用于临床监测。结果显示，ibv-n基因全长1230bp，gst融合蛋白表达产物大小约为80kda，表达量约占菌体总蛋白的25%，具有良好的免疫学活性；通过gst亲和层析柱成功获得纯化蛋白，以该蛋白包被酶标板，成功地建立了一种检测血清中ibv抗体的间接elisa方法。研究表明重组n蛋白作为ibv诊断抗原，具有制备简便、特异性强、敏感性高、重复性好的特点，可用于该病的临床监测，为该病疫情监测、发病机制研究奠定了基础。