新的肝细胞生长因子hppcn的表达、纯化及体外活性检测

目的：建立rhhppcn在大肠杆菌中的表达体系，纯化表达产物并检测其体外生物活性。方法：以puc18-hppcn为模板，构建原核表达载体pet-24a(+)-hppcn，转化到大肠杆菌bl21中并诱导表达目标蛋白，离子交换色谱法纯化目标蛋白，westernblot分析其免疫原性，mtt法和3h-tdr掺入法检测其体外活性。结果：成功构建出原核表达载体pet-24a(+)-hppcn，并诱导使目标蛋白的表达量较高，表达产物中hppcn23％以可溶形式存在，两步离子交换后可得纯度为94.2％，westernblot鉴定为目的蛋白，mtt法和3h-tdr掺入法检测其具有明显的促肝癌细胞系增殖活性。结论：成功构建出原核表达载体并实现了目标蛋白高表达，两步离子交换法纯化出所需纯度的蛋白，并验证了其较强的体外促肝癌细胞系增殖活性。