中华眼镜蛇心脏毒素（cardiotoxinⅲ,ctxⅲ）的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达

心脏毒素cardiotoxinⅲ(ctxⅲ)是中华眼镜蛇毒主要组分之一，根据genbank中已有的ctxs序列设计特异性引物，从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的ctxⅲ片段，并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌his-patchthioredoxinb载体中，重组ctxⅲ经渗透休克分泌至胞外。将ctxⅲ基因插入酵母ppic9k分泌型表达载体重组表达，n端带有三个氨基酸（gyt）残基的重组ctxⅲ（rctxⅲ）分泌量达9.5mg/l，经一步凝胶过滤纯化，其纯度达90％以上，纯化率达65％。经细胞毒性实验检测，纯化的rctxⅲ12h的ic50为4.66?g/ml，证实重组蛋白具有良好的生物学活性。