人白细胞介素10基因慢病毒载体的构建及其对cci大鼠的镇痛作用

目的构建含人白细胞介素10基因的慢病毒载体lv-hil-10，观察鞘内注射lv-hil-10对坐骨神经松结扎模型（chronicconstrictioninjury，cci）大鼠的镇痛作用。方法应用pcr从pcyil-10质粒上扩增hil-10基因，把hil-10基因亚克隆至pwpxl质粒上得到重组质粒pwpxl-hil-10，将pwpxl-hil-10与pspax2、pmd2.g共转293t，收集上清浓缩后制备lv-hil-10。同时将空质粒pwpxl-gfp与pspax2、pmd2.g共转293t，收集上清浓缩后作实验对照。纯种健康清洁级成年雄性sd大鼠135只,随机分为9组:cci疼痛模型4组（c0、c1、c2、c3），假手术4组（s0、s1、s2、s3）和正常对照组（n组）。给药组在蛛网膜下腔分别注射lv-hil-10（c1组、s1组）、lv-gfp（c2组、s2组）、生理盐水（c3组、s3组），对照组c0组、s0组不做鞘内置管，不给药。各组在手术造模成功实施鞘内注射后观察lv-hil-10组不同时间点痛阈的改变及脊髓、脑皮质、海马中的hil-10mrna和蛋白表达。结果获得il-10基因片段，成功重组pwpxl-hil-10载体，经序列验证无误。质粒共转染293t细胞后，获得了高滴度（2x1010）、高纯度的lv-hil-10病毒颗粒。cci大鼠鞘内注射lv-hil-10后痛觉异常明显缓解，脊髓、脑皮质、海马中的il-10表达上调，脊髓中il-10表达上调最显著。结论鞘内注射慢病毒感染导入型人il-10表达质粒对cci大鼠有明显镇痛效应