利用rnai抑制曼地亚红豆杉细胞紫杉烷14β-羟基化酶基因的表达

目的：利用rna干扰技术抑制紫杉烷14β-羟基化酶(简称14oh)基因的表达。方法：以曼地亚红豆杉(taxus×media)为材料，通过农杆菌介导的双元载体转化系统将针对14oh基因构建的rna干扰载体导入该植物细胞中。应用pcr-southern技术对转基因细胞进行了鉴定。另外，利用rt-pcr技术检测14oh基因mrna表达水平，并采用hplc技术对转基因细胞系中三种c-14氧取代的紫杉烷成分进行测定。结果：southern检测证实转基因实验获得成功，rt-pcr结果表明转基因细胞系中14oh基因mrna表达水平与对照组相比显著下降，hplc分析显示c-14氧取代的紫杉烷含量也有明显降低。结论：该rna干扰技术有效地抑制了曼地亚红豆杉细胞内14oh基因的表达，有望为提高紫杉醇的生物合成产量提供一条新途径。