人trim5α嵌合体蛋白与hiv-1gag蛋白体外分子间相互作用的鉴定

目的:表达和纯化人trim5α嵌合体蛋白［trim5α-h(r328-332)］，并探讨该蛋白和hiv-1gag间的相互作用。方法:将构建的trim5α嵌合体pet-28a-trim5α-h(r328-332)，转化大肠杆菌bl21(de3),获得重组表达质粒pettrim5α-h(r328-332)，30℃下经iptg诱导，该融合蛋白在大肠杆菌bl21(de3)中表达。获得的重组的蛋白再经过纯化，sds-page分析重组蛋白，并用免疫共沉淀技术和elisa等检测重组蛋白与hiv-1gag间的相互作用。结果:构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达，重组trim5α-h(r328-332)蛋白经纯化复性后，通过免疫共沉淀和elisa等技术,证明trim5α-h(r328-332)蛋白能够与hiv-1gag间的相互作用。结论:在大肠杆菌表达系统中成功表达了重组trim5α-h(r328-332)蛋白，并且证实其在体外与hiv-1gag有结合作用。[摘要]　目的:表达和纯化人trim5α嵌合体蛋白[trim5αh(r328-332)]，并探讨该蛋白和hiv-1gag间的相互作用。方法:将构建的trim5α嵌合体pet28atrim5αh(r328-332)，转化大肠杆菌bl21(de3),获得重组表达质粒pettrim5αh(r328-332)，30℃下经iptg诱导，该融合蛋白在大肠杆菌bl21(de3)中表达。获得的重组的蛋白再经过纯化，用sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析重组蛋白，并用免疫共沉淀技术、hispulldown和elisa等检测重组蛋白与hiv-1gag间的相互作用。结果:构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达，经纯化后的重组trim5αh(r328-332)蛋白纯度可达90%以上。通过免疫共沉淀、gstpulldown和elisa等技术,证明trim5αh(r328-332)蛋白能够与hiv-1gag间的相互作用。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中成功表达了重组trim5αh(r328-332)蛋白，并且证实其在体外与hiv-1gag有结合作用。