人dff45蛋白多克隆抗体制备及其初步应用

目的：表达、纯化带gst标签的dna裂解因子45（dnafragmentationfactor45,dff45）融合蛋白并制备多克隆抗体。方法：构建pgex-5x-1/dff45原核表达质粒，转化大肠杆菌bl21，用iptg诱导融合蛋白表达，经纯化后免疫日本大耳白兔得到多克隆抗体并用cnbr-activatedsepharose?4b进行纯化。用间接elisa法检测抗体效价，westernblot鉴定抗体特异性，同时用免疫荧光染色鉴定抗体特异性并观察dff45的细胞定位。进一步检测dff45在人类几种细胞系的表达差异情况。结果：成功构建原核表达质粒，表达、纯化dff45蛋白并免疫动物后得到多克隆抗体。间接elisa法显示抗体效价达1:20000，westernblot确定抗体具有高度特异性。应用该抗体检测发现dff45在人类几种细胞系中表达存在差异并观察到其细胞定位。结论：dff45多克隆抗体的成功制备及其在人类细胞系的差异表达，为进一步研究dff45基因与肿瘤及其相关疾病的关系奠定了基础。