高活性重组hg-csf的制备

我们构建了新的硫氧还蛋白（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ）融合表达载体ｐｅｔｔｒｘｌ和ｐｅｔｔｒｘ－ｈｉｓｌ，它们可使功能蛋白在大肠杆菌胞质中以可溶性形式高效表达。利用此表达系统成功地获得的ｈｇ－ｃｓｆ－硫氧还蛋白融合蛋白的高效可溶性表达，表达水平达总细胞可溶蛋白的４１％以上。所表达的ｈｇ－ｃｓｆ－硫氧还蛋白融合蛋白可通过ｃｕ２＋－ｉｄａｓｅｐｈａｒｏｓｅｆｆ固相金属螯合层析柱，方便地从细胞破碎可溶上清中直接纯化。所获得的融合蛋白具有ｈｇ－ｃｓｆ特异的生物活性，其比活性达到０．５－１．３３×１０７ｕ／ｍｇ融合蛋白。这样表达的ｈｇ－ｃｓｆ融合蛋白能被ｉｇａ蛋白酶特异地切割，将ｈｇ－ｃｓｆ从融合蛋白上切下获得与天然蛋白一级结构完全一致的重组ｈｇ－ｃｓｆ。