胸膜肺炎放线杆菌apxii毒素的原核表达和复性

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅱ毒素的结构基因apxⅱa在e.coli中利用原核表达载体pgex-6p-1进行了原核表达，表达产物rapxⅱ以包涵体形式存在。包涵体蛋白用含0.5%tritonx-100的50mmol/ltris-hcl(ph8.0)、1mmol/ledta的缓冲液洗涤2～3次，再用1mnacl洗涤一次，然后用6mol/l的盐酸胍溶解变性。变性的蛋白溶液经稀释后用含有还原型谷胱甘肽（gsh）和氧化型谷胱甘肽(gssg)以及0.5mol/ll-精氨酸的20mmol/ltris-hcl(ph8.3)、1mmol/ledta缓冲液进行透析复性，透析后的溶液用聚乙二醇20000（peg20000）浓缩，再用20mmol/ltris-hcl(ph8.3)、1mmol/ledta的缓冲液透析，然后用glutathione-sepharose4b纯化试剂盒进行纯化。经溶血实验证明，经洗涤、变性和复性后的重组蛋白恢复了天然蛋白的活性，能够溶解1%的绵羊红细胞悬液。