猪4种呼吸道疾病病毒基因芯片诊断方法的建立

根据genbank发表的核酸序列，分别设计合成流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒的特异引物,应用pcr（或rt-pcr）分别扩增各病毒的特异片断，并克隆到pmd18-tsimplevector构建重组质粒，用于各病毒探针的制备。将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上，制备成低密度基因芯片。在多重pcr过程中，用生物素标记的dutp(bio-11-dutp)对待检样品进行标记，扩增产物与基因芯片杂交，最后用扫描仪进行读片和分析。对临床疑似病例检测结果表明，该方法可以同时检测待检样品中4种病毒的存在情况，与pcr方法相比，显示了较高的灵敏度。该方法的建立，为批量样品的检测和猪呼吸道疾病综合征流行病学调查提供了一种快速、灵敏和高通量的手段。