人脂联素基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

脂联素（adiponectin）是一种与肥胖、胰岛素抵抗、ⅱ型糖尿病及心血管疾病密切相关、具有多样生物学调节功能的特异脂肪细胞因子，潜在的应用价值十分巨大。在本工作中，首先以人血液基因组总dna为模板，独特地利用引物重叠延伸法，扩增并合并脂联素两个外显子片段的编码序列，得到了全长的、经测序验证准确的人脂联素基因（ap）。将ap基因以融合表达形式克隆到大肠杆菌载体pet32a(+)中，成功构建了表达载体pet-wap。在iptg诱导下，硫氧还蛋白－脂联素融合蛋白获得了高效表达，达细菌蛋白总量的41%以上，重组蛋白主要以包涵体形式存在。目前，对人脂联素及其球状结构域的高效可溶性表达研究正在进一步进行当中。