表达gfp基因的马立克氏病病毒(mdv)转移载体的构建及初步应用

利用primerprimer5.0软件设计两条引物，将loxp位点分别引入正、反向引物，以质粒载体pires-gpt为模板，扩增获得loxp-cmv-gpt-ires-loxp基因表达盒(约2.9kb)，将其克隆入质粒pbus10(含有mdvus10区)的balⅰ位点，获得重组质粒pus-gptires(l)；对重组质粒pus-gptires(l)进行测序分析，发现两同向的loxp位点正确插入到pus-gptires(l)中；将含有完整的gfp基因以及polya尾的基因片断，连入pus-gptires(l)中，把gpt基因替换掉，从而获得重组质粒pus-gfpires(l)。将转移载体pus-gfpires(l)瞬时转染cho细胞，可以观察到绿色荧光，说明gfp基因获得有效表达；将pus-gfpires(l)转染已感染mdvcvi988株的cef细胞，可以筛选到表达绿色荧光蛋白的重组病毒；通过测定重组病毒在细胞上的生长曲线，发现重组病毒与亲本毒生长曲线相吻合。本研究为进一步探讨mdv在体内的特性奠定基础，同时，为cre/loxp重组酶系统在mdv中的应用奠定基础。