植酸酶基因的多点突变及在毕赤酵母中的高效表达

根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,不改变其编码氨基酸序列，对来源于黑曲霉n25植酸酶phya基因，进行了突变，构建了含有正确突变的酵母表达载体ppic9k-phyam-4,电击转化毕赤酵母，获得优化了密码子的重组酵母转化子。经pcr鉴定表明，植酸酶基因已整合到酵母基因组中；表达产物的sds-page分析表明，酶蛋白分子大小为70.15kd。southernblotting结果表明,phya基因整合到酵母染色体dna中；转化子酶活测定结果表明，经密码子优化的重组酵母pp-npm-4-2酶活可达136900u/ml，比arg没有优化的pp-npm-8(47600uoml-1)酶活高约2.8倍。