副溶血弧菌lamp检测方法的建立

副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术（loop-mediatedisothermalamplification,lamp）应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因（tlh）设计四条特异性引物（两条内引物和两条外引物）进行lamp扩增，对扩增反应进行优化，最佳反应时间为60min，反应温度为60℃。对12种细菌共28株菌进行lamp扩增，仅14株副溶血弧菌得到阳性扩增结果，证明引物具有很高的特异性。副溶血弧菌基因组dna和纯培养物的检测灵敏度分别约为90fg和24cfu/ml。对模拟食品样品进行直接检测，检测限为89cfu/g。结果表明，该方法检测副溶血弧菌特异性强、灵敏度高，并且操作简便、检测成本低，1h即可完成，有望发展成为快速检测副溶血弧菌的有效手段。