重组肿瘤坏死因子-α衍生物的制备及聚乙二醇修饰

应用搭桥pcr技术，将肿瘤坏死因子-α基因的前4位氨基酸的编码序列删除，对htnf-α的第8/9/10/29/31/157位氨基酸的密码子进行定点突变，将突变后的cdna插入到pbv220载体中构建重组质粒pbv220-tnf-αd4。将重组质粒转化大肠杆菌dh5α，筛选获得了高效表达tnf-αd4突变体的工程菌，表达的重组蛋白约占菌体蛋白总量的45%左右，经硫酸铵沉淀和阳离子交换层析纯化得到纯度达90%以上的重组目的蛋白，比活性达到8×107。用单甲氧基聚乙二醇-丁醛（mpeg-butyrald）对tnf-αd4进行修饰，经阳离子交换层析纯化得到纯的mpeg-tnf-αd4，纯度达85%以上，比活性达到8.6×107，系统毒性也有了明显的降低。此项工作通过应用peg修饰肿瘤坏死因子-α，为降低其毒性，增加其活性进行了有益的尝试，为其进一步研究与开发奠定了基础。