融和蛋白gst-sumo-mt在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究

将编码融合蛋白gst-sumo-mt的dna片段连接到大肠杆菌表达载体pet-28a中，构建重组表达质粒pet-gs-mt并转化到大肠杆菌origami（de3）中。20℃，1mm的iptg诱导20h后，获得分子量约为43kd的融合蛋白，表达量占菌体上清总蛋白的38.4％。利用谷胱甘肽交联琼脂糖（glutathionesepharose4b）凝胶柱和sephardexg-25分子筛联用可以得到纯度为95%以上的融合蛋白，得率约为70mg/l。该融合蛋白可与gst抗体产生阳性反应。融合蛋白gst-sumo-mt可以显著提高宿主对cd2+、zn2+和cu2+离子聚积的能力，其耐受能力比对照组分别提高4.2倍、4倍及1.6倍。此外，原子吸收光谱法测定，每分子gst-sumo-mt可以结合2-3个cd2+离子。