应用rnai技术培育抗2种病毒病的转基因烟草

分别提取烟草普通花叶病(tmv)和烟草黄瓜花叶病（cmv）的病毒rna。经反转录和外壳蛋白阅读框pcr扩增，获得tmv和cmv外壳蛋白基因cdna,分别进行两种病毒已知株系cdna序列比对获得各自的保守序列，设计干涉序列，将干涉片段扩增产物连接到pmd18-t的相邻酶切位点，制备融合序列，并将其正向和反向序列插入puccrnai载体,再转化到pcambia2300-35s-ocs表达载体中。利用农杆菌lba4404侵染烟草k326,获得3份含有tmv和cmv外壳蛋白基因干涉序列的转化材料，经分子鉴定证实干涉序列已导入烟草，并采用荧光定量pcr技术对其mrna表达差异进行分析。抗病性调查表明转化烟株对tmv和cmv抗性都显著增强。