neuronatinshrna真核表达载体的构建及其生物学功能

目的:获得能持续干扰neuronatin（nnat）基因表达的细胞，观察nnat基因沉默对神经细胞发育与分化的影响，为研究基因功能奠定基础。方法:构建含nnat基因短发夹rna(shrna)表达质粒，将质粒转染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞pc12,rt-pcr方法筛选出最有效干扰质粒，稳定转染pc12细胞后观察细胞表型变化，免疫荧光检测nnat蛋白表达，ngf诱导观察nnat表达下调对细胞分化的影响。结果:成功构建并筛选出有效的靶向nnat基因的shrna真核表达载体；载体稳定转染pc12细胞之后能特异性沉默nnat基因的表达，pc12细胞长出突起，向神经元方向分化，加入诱导因子ngf后能促进突起生长。结论:nnat可能是作为神经分化抑制因子在神经发育与成熟过程中发挥作用。