sumo蛋白酶的发酵和纯化工艺的研究

目前,小分子肽多需要进行融合表达，虽然有gst标签等表达体系，但是表达产物切割时仍留有多余氨基酸，影响小分子肽的功能；sumo蛋白酶对sumo融合表达系统表达的重组蛋白进行切割时没有多余氨基酸残留，因此成为蛋白切割工具的热点。利用基因工程技术构建重组his-ulp1/pet3c/bl21（de3）工程菌株，用摇瓶优化表达条件，摸索高密度发酵工艺和不同层析纯化工艺条件。结果表明，经1.0mmol/l的iptg30℃诱导表达6h，表达效果最好。罐发酵后菌体sdspage分析表达量可达24.39%，通过cmsepharosefastflow阳离子交换一步层析可获得纯度大于98%的sumo蛋白酶，每升发酵液可获得355mg的sumo蛋白酶纯品。westernblot分析表明，ulp1能与6×his抗体产生免疫反应。为日后大规模产业化生产奠定了基础。