reca蛋白介导的三链核酸结构形成及其序列提取

人工合成的单链dna分子经pcr扩增形成双链dna分子。将reca蛋白与生物素标记的寡聚核酸探针序列在atpγs存在的情况下共同哺育，使reca蛋白包裹寡聚核酸探针，然后加入含同源序列的上述双链dna分子经适当环境哺育形成了稳定的局部三链核酸结构。通过加入链亲和素包裹的磁珠吸附生物素化的探针，这样同源双链dna分子与寡聚核酸探针形成的局部三链核酸结构也被吸附在磁珠上。使用磁分离装置提取这一结构，逐步降低盐离子浓度以洗脱双链dna分子。将洗脱液中残留的蛋白质去除，经pcr扩增可获得目的dna序列。同时使用同源探针和非同源探针在其它序列中提取目的dna序列，结果显示目的dna序列只被同源探针提取。实验结果显示了这一三链核酸结构形成的序列特异性，并且其稳定性随盐离子浓度降低而下降。提示在这一结构中同源的寡聚核酸单链与双链dna分子形成了氢键结合，同时提示使用文中描述的方法可以提取特异的序列，用以克隆相应的基因。