α-2,6唾液酸转移酶(st6gal1)的cdna克隆、原核表达及生物活性研究

从hepg2细胞中提取总rna，经rt-pcr扩增α-2,6唾液酸转移酶基因，构建于pmd-18t克隆载体中，经序列测定后与genbank中报道的已知序列比对完全一致，再将已知目的序列插入原核表达载体pet-28a(+)中。将构建正确的原核表达载体转化表达受体菌bl21（de3）中，iptg诱导其进行表达并鉴定目的蛋白，对鉴定正确的目的蛋白复性后经ni2+亲和层析柱纯化获得高纯度的α-2,6唾液酸转移酶蛋白。然后用霍乱弧菌神经氨酸酶处理健康鸡红细胞，清除鸡红细胞表面所有类型的唾液酸寡糖链；再用表达的α-2,6唾液酸转移酶以cmp-唾液酸作为底物在霍乱弧菌神经氨酸酶处理的鸡红细胞表面标记上saα2,6gal受体。将标记有saα2,6gal受体的鸡红细胞应用微量血凝试验和流式细胞仪进行检测，以验证所表达蛋白的生物活性。结果表明，原核表达的α-2,6唾液酸转移酶具有较好的生物活性。