芪合酶基因fm-sts在何首乌毛状根中的过量表达及dsrna干扰

目的:建立一套探究植物基因功能的方法体系,验证由芪合酶基因保守序列通过race扩增技术在何首乌中得到的基因fm-sts的功能。方法:由含camv35s启动子驱动的gfp基因的植物转基因表达基础质粒pbin-35s-gfp构建过表达质粒pbin-35s-sts-gfp(阳性)和双链rna干扰重组质粒pbin-35s-正向-反向-gfp(阴性),并同空白表达质粒pbin-35s-gfp(空白)均导入野生型发根农杆菌atcc15834中,转化何首乌外植体,诱导生成毛状根并培养,对毛状根进行高效液相色谱分析以及实时荧光定量检测。结果:在过表达组、空白组和干扰组中毛状根中发根农杆菌ri质粒中的rolb基因和外源基因gfp均有表达,高效液相色谱法分析芪合物二苯乙烯苷含量依次为4.67mg/g、2.18mg/g和0.65mg/g,在mrna水平上测试荧光定量检测基因fm-sts表达量:rnai组是空白组的1/433.53,过表达组是空白组的2.41倍。结论:结果表明过量表达与双链rna干扰相结合在植物基因功能研究中有良好的应用,何首乌中芪合酶fm-sts是二苯乙烯苷主要的合成酶。