重楼活性单体pp-10通过抑制pi3k/akt通路诱导人胃癌细胞bgc-823凋亡和自噬

目的:探讨重楼/七叶一枝花(parispolyphylla)的醇提物单体pp-10诱导人胃癌bgc-823细胞凋亡和自噬及其分子机制。方法:采用mtt法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体pp-10对人胃癌bgc-823细胞的增殖抑制作用;hoechst33342染色法检测pp-10作用于人胃癌bgc-823细胞后细胞核形态的改变;annexinv-fitc/pi双染法检测细胞凋亡;westernblotting检测重楼单体pp-10对细胞凋亡和自噬相关蛋白caspase-3、caspase-9、(adp-核糖)聚合酶(parp)、bax、bcl-2、lc3、p62以及pi3k/akt信号通路相关蛋白(akt、p-akt、mtor、p-mtor、p70s6k、p-p70s6k)表达的影响。结果:重楼单体pp-10能显著抑制bgc-823细胞的生长,作用呈时间-效应关系及剂量-效应关系;克隆形成抑制实验表明随着pp-10浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与对照组相比有显著差异;在荧光显微镜下观察可见其细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测显示,随着作用药物浓度的增高,其凋亡率逐渐升高;westernblotting结果表明,随着药物浓度的增加,线粒体相关凋亡信号通路蛋白caspase9、caspase3及parp均出现酶切活化条带,细胞促凋亡蛋白bax的表达水平增加,抗凋亡蛋白bcl-2减少,自噬相关蛋白ⅱ型lc3增加,p62蛋白减少,p-akt蛋白的表达水平下降,akt下游蛋白p-mtor、p-p70s6k表达减少。结论:重楼单体pp-10通过抑制bgc-823细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬,与下调p13k/akt信号通路有关。