基于hpv16e7蛋白ctls抗原肽的病毒样颗粒治疗性疫苗的构建

目的:构建呈递hpv16e7ctls抗原表位的病毒样颗粒,并初步评价病毒样颗粒作为治疗性疫苗载体的潜能。方法:根据文献选择有效的hpv16e7ctls表位,合成其正负链寡核苷酸序列,并通过退火形成双链dna片段。将片段克隆于表达乙肝核心抗原的重组质粒pthiohisa-hbcag,使抗原肽得以呈现于病毒样颗粒。重组菌经iptg诱导后经sds-page鉴定目的蛋白表达。菌体破碎后经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心进行纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜鉴定病毒样颗粒的存在。制备的病毒样颗粒免疫接种了tc-1细胞的肿瘤模型小鼠,检测小鼠肿瘤大小。此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以elisa检测ifn-γ表达水平。结果:构建的三个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建正确。表达的重组蛋白大小与预期相符,并形成了病毒样颗粒。免疫小鼠后显示了抑制肿瘤增长的一定作用趋势。此外,抗原肽体外刺激促进了疫苗免疫小鼠脾细胞ifn-γ的表达,显示疫苗引起机体产生e7特异性的细胞免疫应答。结论:hbcagvlps是有潜能的治疗性疫苗载体。