骆驼蓬脂转移蛋白基因真核表达载体的构建及其体内外抗瘤效应的研究

目的：构建骆驼蓬脂转移蛋白（lipidtransferproteinfrompeganumharmala，phltp）基因真核表达质粒，并探讨其对黑色素瘤b16细胞在体内外的抗肿瘤作用。方法：将phltp基因亚克隆至pcdna3.1上，获得重组质粒pcdna3.1-phltp；用脂质体转染法将重组质粒及空载体外转染b16细胞，mtt检测其对b16细胞生长的影响。建立b16荷瘤小鼠模型，设重组质粒（pcdna3.1-phltp）、空载（pcdna3.1）、生理盐水和阳性药物（ctx）组，分别处理小鼠后测量各组肿瘤体积并称瘤重，计算抑瘤率。光镜观察鼠脾、肝等组织变化；免疫组织化学法检测各瘤体中phltp、血管内皮生长因子（vegf）及碱性成纤维细胞生长因子（bfgf）的表达。结果：pcdna3.1-phltp转染b16细胞72h后，细胞增殖能力明显受到抑制（p<0.01）。注射pcdna3.1-phltp组的小鼠肿瘤生长速度明显减慢，肿瘤体积小于空载和生理盐水组（p<0.05）。显微镜下可见重组质粒组肿瘤细胞有不同程度的点、片状坏死，而肝、肺等无明显病理损伤。重组质粒组肿瘤组织中有phltp蛋白的表达，且vegf和bfgf的阳性表达指数都低于空载和生理盐水组（p<0.01）。结论：成功构建了重组表达质粒pcdna3.1-phltp，体内外实验结果显示其能有效地抑制b16细胞的生长，预示了该重组质粒在治疗黑色素瘤中的潜在应用价值。