lmapx基因在大肠杆菌和酵母菌中的表达研究

目的：研究枸杞抗坏血酸过氧化物酶基因（ascorbateperoxidase，lmapx）在原核中的表达和酶学特性以及在酵母菌中的抗氧化能力，为进一步研究逆境诱导的抗氧化胁迫的作用机理奠定理论基础。方法：将lmapx转入大肠杆菌bl21中进行异源表达，采用ni2+亲和层析，纯化重组蛋白，并对不同温度和ph值下的酶活进行研究，lineweaver-burk双倒数作图法测定该酶的km和vmax值。将lmapx转入酵母菌株w303中进行h2o2和nacl氧化胁迫处理。结果：该酶的最适温度和最适ph值分别为40℃和6.5。当抗坏血酸（ascorbicacid，asa）浓度过量时，对h2o2的km和vmax分别是0.17±0.02mmol/l和11.78±1.88mmol/min·mg；当h2o2浓度过量时，对asa的km和vmax分别是2.19±0.40mmol/l和58.82±3.51mmol/min·mg。含有lmapx基因的酵母菌株，在半乳糖的诱导下在8mmol/lh2o2和100mmol/lnacl的培养基上的生长都明显优于对照组。结论：lmapx蛋白具有很好的抗氧化性和耐盐性。