乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建

乳腺生物反应器具有广阔的开发前景，而提高目的基因的表达量是该领域一个重要的研究课题。因此，选用强的非特异性启动子pcag，而不是乳腺特异性启动子来实现高效表达；通过cre/loxp系统和山羊β-乳球蛋白启动区（pblg）表达cre重组酶来实现载体的自删除以达到乳腺特异表达的目的。方法：构建含polya终止信号的cre乳腺特异表达元件polya-pblg-cre，插至强启动子pcag驱动的报告基因lacz表达载体中，构建成乳腺特异表达载体pcbcz（pcag-loxp-polya-pblg-cre-loxp-lacz）。转染细胞实验结果：pcr鉴定确认pcbcz载体在小鼠乳腺上皮细胞（hc11）中发生cre-loxp同源重组。x-gal染色表明载体能驱动lacz在hc11细胞中高效表达β-半乳糖苷酶，而在nih3t3细胞中仅少量表达。结论：构建的pcbcz载体能高效驱动外源基因在乳腺细胞中表达，且具有较好的乳腺特异性，为研发乳腺生物反应器表达载体提供新的方法。