苦瓜map30蛋白的原核表达及其生物活性研究

以天然苦瓜基因组为模板pcr扩增去前导肽后成熟的map30蛋白基因，克隆至可诱导表达载体pet28a中。将含map30基因的表达载体pet28a-map30转化至e.colirostta（de3）中并通过iptg诱导表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）和蛋白杂交（westernblot）以及液相色谱-质谱（lc-ms）对表达的重组map30蛋白进行鉴定，并通过镍柱亲和层析纯化。将puc19质粒与不同浓度的纯化后的重组map30蛋白孵育，分析其切割dna的活性。同时将纯化后的重组map30蛋白体外作用于人乳腺癌细胞（mcf-7），采用mtt、ao/pi双染等方法进行抗肿瘤活性分析。实验结果表明纯化后的蛋白经质谱鉴定和westernblot分析，目的蛋白成功地与his-tag融合表达。首次发现大肠杆菌异源表达的重组map30蛋白同天然蛋白一样可以切割超螺旋dna活性。mtt、ao/pi双染结果证实重组map30体外可诱导mcf-7细胞发生凋亡。通过基因工程技术大量制备map30蛋白，进一步研究其体外生物学活性，为以后的临床应用奠定基础。