cfp10-esat-6-mpb64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定

目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统（baculovirusexpressionvectorsystem，bevs）中表达结核分枝杆菌蛋白cfp10-esat-6-mpb64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因cfp10-esat-6-mpb64连接到pfastbac转移载体并转化dh10bac感受态，通过tn7转座片段将目的基因转座到bacmid中，得到bacmid-cfp10-esat-6-mpb64穿梭载体，脂质体包被后转染spodopterafrugiperda（sf9）细胞收获病毒，病毒转染细胞后收集上清通过co亲和层析纯化得到目的蛋白。纯化的蛋白免疫balb/c小鼠并检测血清中特异性抗体滴度及ppd抗体，elisa检测cfp10-esat-6-mpb64蛋白刺激脾脏细胞产生ifn-γ的浓度，mtt法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：cfp10-esat-6-mpb64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90%以上，蛋白产量为42mg/l，纯化蛋白能有效刺激balb/c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中ifn-γ的含量，目的蛋白在1~50μg/ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。