hbcag基因在甲醇型酵母中的表达、产物纯化及其性质的初步研究

为研究乙肝核心抗原蛋白(hbcag)在甲醇型酵母(pichiapastoris)中的表达和性质,用pcr方法将hbcag基因(l)克隆到p.pastoris胞内表达载体ppic3k中,并利用电击和同源重组法,将重组质粒ppic3kl转化感受态的甲醇型gs115酵母菌株。经过筛选得到阳性p.pastoris重组子。重组菌株经甲醇诱导培养,表达产物的western印迹结果表明,hbcag蛋白能在甲醇型酵母(pichiapastoris)中诱导表达,产物为一215kda的蛋白。经蔗糖密度梯度超离心和cscl密度梯度超离心纯化后,elisa和密度测定结果表明重组hbcag蛋白主要分布在密度为12576gml和13013gml的2个峰值处。电镜观察表明,该重组hbcag蛋白能自主装配成大小不同的2种颗粒(即核心颗粒),大颗粒直径约34nm左右,小颗粒直径约30nm左右。同时,我们还观察到,该核心蛋白颗粒在体外可发生集聚现象。