最早传入北京地区的sars冠状病毒s基因序列分析和克隆

sars冠状病毒的spike(s)蛋白对病毒的致病力至关重要,也是机体特异性体液和细胞免疫主要针对的靶分子。从北京地区最早发现的sars患者咽拭子细胞培养上清中提取病毒rna,用反转录巢式聚合酶链式反应(rtpcr)分6个片段扩增出s基因全序列,用ta载体克隆后进行dna序列分析,再通过重叠pcr将6个片段连接成一条完整的s基因并克隆测序。dna测序结果表明病毒s基因序列与报告的bj01株sars冠状病毒s基因序列完全一致,用重叠pcr将6个s基因片段连接成了一条完整的s基因,插入到pgemt载体后读序完全正确。上述结果表明最早传入北京地区的病毒与新近报告的bj01株sars冠状病毒在分子流行病学上具有同源特征,重叠pcr技术可以用于有效连接多个基因片段。s区全基因的克隆为进一步研究该基因的功能和dna疫苗等研究提供了基础。