用sars冠状病毒全基因组芯片杂交方法分析sars-cov

为从临床样品中检测和分析sarscov病毒打基础,并为分析sarscov病毒的复制和转录等机理提供一种有效方法。以sars冠状病毒tor2株序列作为标准设计和制备一种覆盖sars冠状病毒全基因组的寡聚核苷酸芯片,探针长度为70nt,每相邻的探针序列重复25nt,共660条。用该芯片分析了细胞培养的sarscov病毒总rna、7个sarscov病毒的基因克隆片段。对rna样品用随机引物进行反转录pcr获得cdna。对dna用随机引物扩增和dutpcy3标记。结果用这种芯片杂交检测sarscov病毒rna可见阳性信号呈全基因组分布,并且有多处连续的阳性信号点;用正常人的白细胞rna为对照,杂交未出现明显阳性信号。检测7个sarscov病毒基因克隆片段,在该片段相应的探针区段出现连续阳性信号点。这种方法可有效地检测和分析样品中sars冠状病毒全基因组的信息。