基于c-kit+显微形态标记及流式分选分离心脏telocytes

目的:建立基于显微形态标记及流式分选分离大鼠心脏telocytes(cts)的方法。方法:采用抗体c-kit免疫磁珠法获得原代心脏telocytes,显微注射dii标记具"telopode"典型形态的细胞,使用流式分离及回收单个dii+细胞;使用免疫荧光技术和rt-pcr方法对经回收的单个细胞来源的细胞进行表型鉴定。结果:显微注射dii能较好地标记具telocytes典型形态的细胞,结合流式分选及单细胞回收,能有效回收经标记的dii+细胞,经回收的dii标记阳性telocytes的贴壁率为14.9%,增殖率为5.6%,呈克隆样生长率为2.4%,该呈克隆样生长的细胞能通过消化传代。免疫荧光染色证明,该回收telocytes表达其相对特异性表面标记物c-kit和cd34,rt-pcr的结果也证明:经回收telocytes表达其相对特异基因c-kit、cd34、vimentin和pdgfr-β。结论:研究所建立的方法能有效分离及单细胞回收高纯度的心脏telocytes,经回收的心脏telocytes具有增殖及传代能力,且能维持其特异表型。