逆转录法筛选mrna靶点设计核酶对gpa的表达干预实验研究

采用自行设计5’固定3’随机的文库对基因mrna进行杂交用于逆转录反应以筛选mrna的寡核苷酸结合靶点。对人i型跨膜糖蛋白—血型糖蛋白a（glycophorina，gpa）的mrna筛选了4个反义寡核苷酸可结合靶点，分别设计反义核酸（antisense），分别加入mrna中用rnaseh验证各靶点的核酸结合和切割效率，最终确定2个高效结合和切割靶点。再设计ribozyme，构建表达核酶（ribozyme）质粒，利用慢病毒（lentivirus）包装技术，感染人源红系白血病细胞株k562细胞，在细胞水平验证其下调gpa基因表达的效果，对转染细胞mrna进行反转录和realtimepcr分析mrna表达水平，并在蛋白水平进行了westernblot分析。结果表明文库结合逆转录方法筛选靶点设计的ribozyme具有高效率下调膜受体表达的作用，gpa为i型跨膜糖蛋白，该实验为筛选mrna靶点提供参考方法，并对膜受体表达干预有参考价值。