人心型脂肪酸结合蛋白(h-fabp)的原核表达、纯化和冻干品的制备

目的：获得重组人心型脂肪酸结合蛋白，分析其活性及制备冻干品。方法：从genbank中检索人源h-fabpcds序列，合成基因后构建原核表达载体pet-28a（+）-h-fabp。将表达载体转入e.colibl21（de3），摸索pet-28a（+）-h-fabp最佳诱导条件，表达并纯化重组蛋白。使用检测试剂检测纯化后的重组h-fabp活性，研究最佳冻干方案并考察冻干品的稳定性。结果：经过优化诱导条件，重组h-fabp在bl21（de3）中以可溶性蛋白形式表达。诱导条件为od600≈0.6，iptg终浓度0.4mmol/l，30℃诱导4h。通过ni2+亲和层析纯化可得到纯度大于95%的重组h-fabp蛋白。重组h-fabp冻干品可以在37℃稳定保存12d，25℃、4℃稳定保存至少4个月。结论：本项研究中的重组h-fabp表达体系成熟、蛋白活性高，冻干品稳定性好，为后续研究提供了稳定高效的生物原材料。