rnai沉默cxcr7对人结肠癌细胞sw620特异性靶向抑制的实验研究

目的：探讨慢病毒介导的cxcr7-shrna转染人结肠癌细胞株sw620后对cxcr7蛋白表达的影响。方法：（1）设计并合成cxcr7的3对shrna序列及1对阴性对照序列，与psilencertm4.1系统合成构建重组慢病毒载体，转染hek293t细胞包装病毒并检测滴度；（2）将3种重组慢病毒载体及阴性对照分别感染人结肠癌细胞sw620，rt-pcr检测cxcr7mrna的表达情况，测定沉默效率，筛选沉默效率最高的一组cxcr7-shrna作为后续实验表达载体；（3）mtt法检测转染cxcr7-shrna对sw620细胞生长增殖的影响；（4）通过细胞划痕实验检测转染cxcr7-shrna对sw620细胞侵袭迁移能力的影响；（5）westernblot检测转染cxcr7-shrna对sw620细胞蛋白表达情况。结果：（1）测序证实3对慢病毒载体及1对阴性对照载体均包装成功，滴度分别为3.16×108tu/ml、4.27×108tu/ml、3.93×108tu/ml和2.95×108tu/ml；（2）3组慢病毒载体转染sw620细胞后，cxcr7mrna的表达量均较阴性对照组明显降低（p<0.05），其中cxcr7-shrna-1对cxcr7的抑制率明显高于其他两组（p<0.05）；（3）cxcr7-shrna-1转染sw620后，肿瘤细胞的增殖程度显著减少，与空白组相比有显著性差异（p<0.05）；（4）sw620细胞在划痕24h后，空白对照组和实验组的细胞迁移指数（mi）分别为（49.92±6.41）%和（29.13±5.38）%，有统计学意义（p<0.05），划痕48h后，对照组与实验组的mi分别为（96.52±7.44）%和（72.03±8.29）%，有统计学意义（p<0.05）；（5）cxcr7-shrna-1转染sw620细胞后，与空病毒载体组、空白组相比，cxcr7蛋白表达量明显降低，具有统计学意义（p<0.05）。结论：cxcr7-shrna慢病毒表达载体转染sw620细胞后可有效下调cxcr7mrna和蛋白的表达水平并能够抑制肿瘤细胞的增殖与迁移，为下一步研究以cxcr7/cxcl12生物学轴为靶点的结直肠癌慢病毒基因沉默治疗打下了良好的基础，为结直肠癌的基因治疗提供了新方向。