表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

目的：应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4（nsp4）的重组腺病毒，初步评价其免疫保护效果。方法：构建含野生轮状病毒nsp4基因的穿梭质粒pshuttle-nsp4，与腺病毒骨架质粒padeasy经同源重组后在ad-293细胞中包装获得pad-nsp4重组腺病毒颗粒。电镜、rt-pcr、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠，检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果：获得了滴度为108.25ccid50/ml的重组腺病毒pad-nsp4，免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的elisa血清平均效价分别为1：320和1：1436.8；中和抗体效价1：45.3和1：71.8。结论：表达轮状病毒nsp4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。