转拟南芥atkup1基因高含钾量烟草获得

提取拟南芥幼根总rna,进行rtpcr逆转录,产物测序,将其构建到含km(带内含子)筛选标记的植物双元表达载体上,根癌农杆菌介导法将atkup1基因导入烟草,对转化子进行pcr扩增、gus染色、southern杂交和atkup1基因mrna荧光定量pcr分析,并进行烟叶内在成分化验分析。pcr获得2100bp左右扩增产物,测序结果证实扩增产物序列与拟南芥atkup1基因(genbankno:af029876)一致;得到gus染色阳性的atkup1基因转化烟草材料29株。经pcr扩增、分子杂交检测证实atkup1基因已整合到转基因烟草的基因组,荧光定量pcr分析可以在幼根中检测到atkup1基因的mrna转录。烟叶含钾量化验结果表明导入的atkup1基因在转化材料中成功表达,使烟叶含钾量提高约45%。