乳糖诱导重组尿酸酶基因在大肠杆菌中的表达

对用乳糖替代异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(iptg)诱导重组产朊假丝酵母尿酸酶基因在e.colijm109(de3)中表达进行了研究，拟建立一种高效低成本的生产重组尿酸酶的工艺路线。通过摇瓶试验对诱导所采用的乳糖浓度，诱导时机和诱导持续时间进行了优化，并考察在乳糖诱导下的目的产物表达动力学，随后在5l发酵罐上进行扩大化培养以验证摇瓶优化的结果，进一步将乳糖作为诱导剂应用于高密度发酵过程。实验结果表明乳糖诱导的最佳浓度为5g/l，最佳诱导时机是对数生长期中后期，诱导持续时间为9~10h；按照优化的条件在摇瓶和5l发酵罐上进行分批培养，重组尿酸酶最大表达量可达菌体总蛋白的26%左右，可溶性蛋白的36%左右，略高于iptg的诱导效果；高密度发酵过程菌体终密度达到od600值40以上，尿酸酶表达量占菌体总蛋白25%左右。