13cmfa过程中gc-ms分析菌体蛋白氨基酸的13c标记丰度

基于13c标记的代谢通量分析(13cmfa)由于具有准确性和应用性已成为国际上代谢工程研究的热点，其中一个至关重要的问题就是分析菌体蛋白氨基酸的13c标记丰度信息。用含20%全标记葡萄糖（［u-13c］）和80%天然葡萄糖的合成培养基喂养维生素b12生产菌pseudomonasdenitrifican，然后在稳态条件下取20mg带13c标记菌体用1ml6mol/l盐酸95℃水解24h得到带13c标记的菌体蛋白氨基酸；氨基酸经分离、浓缩、真空干燥、mbdstfa衍生化后得到的tbdms衍生物可以用气相色谱-质谱(gc-ms)进行分析，最后分析质谱图得到15种菌体蛋白氨基酸的13c标记丰度信息。成功获得菌体蛋白氨基酸13c标记丰度信息的实验方法和样品处理技术，为13cmfa在国内进一步发展提供了参考意义。