白喉毒素dt386片段的表达纯化及细胞毒性研究

基于白喉毒素(diphtheriatoxin,dt)的免疫毒素在临床试验中普遍发现毒性反应,但机制尚不清楚。据推测,免疫毒素的细胞毒性源自dt的酶活性区和跨膜转运区(n端386～388个氨基酸,dt386)。为考察dt386毒素片段与毒性反应的关系,将dt386在e.coli中进行了表达、纯化,并初步观察了其细胞毒性。经qsepharoseff离子交换层析,获得纯度达95%的dt386蛋白。dt386杀伤hl60细胞的ic50为2×10-6moll,比免疫毒素的特异杀伤毒性低100倍以上;但在高浓度下,dt386可非特异性杀伤多种细胞。小鼠体内实验初步结果表明,给药剂量高则体内毒性反应强烈。结果提示免疫毒素的剂量限制毒性与dt386的非特异细胞毒性有一定相关性,为进一步开展免疫毒素毒性相关研究提供了有益线索。