曼地亚红豆杉植株中ggpp合成酶的克隆与分析

从5年生曼地亚红豆杉(taxusmedia)的当年生新鲜枝叶中提取分离出mrna,然后根据已知植物的牛儿基牛儿基焦磷酸合成酶基因(ggpps基因)dna序列保守区设计特异简并引物。rtpcr获得了一条大小约600bp的扩增谱带,回收该特异谱带并进行ta克隆,蓝白斑筛选,得到若干阳性克隆。经过质粒大小比较和pcr验证后,进行序列测定和同源性比较。发现该序列属于ggpp合成酶的片断,与taxuscanadensis(aad160181)和abiesgrandis(aal176142)的ggpp合成酶相应区段的氨基酸序列一致性为98%和86%。蛋白质序列分析发现该序列含有一个特征的异戊二烯合成酶保守的结构域。进化树分析表明,曼地亚红豆杉ggpps在进化上位于植物类,靠近古细菌类。曼地亚红豆杉ggpps基因的克隆为研究红豆杉生产紫杉醇的分子机理和转基因植株的构建奠定了良好的基础。