应用复合增强剂扩增人巨细胞病毒pp65全基因

在pcr过程中,模板gc含量过高是一个不利因素。如果设计扩增片段较长,则进一步增加了pcr扩增的难度。解决这一问题对于以pcr成功获取富含gc的长基因有非常重要的意义。以人巨细胞病毒pp65全基因(约1950bp,gc%为67%)为例,在pcr系统中测试不同添加剂(甘油、乙醇、dmso、甜菜碱等)及各种组合,摸索扩增目的基因的最佳条件。结果发现:无或单一的添加剂都不能获得目的基因片段,只有当同时使用dmso和甜菜碱,并在适当浓度时才能够获得特异产物。在pcr系统中包含复合增强剂能有助于高gc%、长基因片段的扩增,为解决此类问题提供了一种有效的途径。